ĐỊNH LƯỢNG CYCLOSPORIN 153

Cyclosporin là thuốc ức chế miễn dịch chống thải ghép ở người bệnh ghép tạng. Cyclosporin trong máu toàn phần được định lượng theo nguyên lý miễn dịch cạnh tranh hai bước sử dụng công nghệ hóa phát quang. Định lượng Cyclosporine là xét nghiệm miễn dịch hai bước để định lượng cyclosporine trong máu toàn phần : Trước khi thực hiện phân tích trên máy, bước tiền xử lý thủ công được thực hiện với mẫu máu toàn phần được ly giải với thuốc thử hòa tan, chiết tách với thu ốc thử kết tủa và ly tâm. Ở bước một, mẫu thử đ ã qua sử lý kết hợp với anticyclosporine đã được phủ trên các vi hạt thuận từ. Sau khi rửa, cyclosporine có đánh dấu acridinium (chất có khả năng phát quang) được cho vào ở bước hai để tạo hỗn hợp phản ứng. Kết quả của phản ứng hóa phát quang được tính bằng đơn vị ánh sáng tương đương (RLU). Sự tương quan tỉ lệ nghịch giữa lượng cyclosporine trong mẫu và RLUs sẽ được bộ phận quang học trong máy phát hiện.

I.NGUYÊN LÝ
Cyclosporin là thuốc ức chế miễn dịch chống thải ghép ở người bệnh ghép
tạng.
Cyclosporin trong máu toàn phần được định lượng theo nguyên lý miễn dịch
cạnh tranh hai bước sử dụng công nghệ hóa phát quang.
Định lượng Cyclosporine là xét nghiệm miễn dịch hai bước để định lượng
cyclosporine trong máu toàn phần : Trước khi thực hiện phân tích trên máy, bước tiền
xử lý thủ công được thực hiện với mẫu máu toàn phần được ly giải với thuốc thử hòa
tan, chiết tách với thu ốc thử kết tủa và ly tâm.
Ở bước một, mẫu thử đ ã qua sử lý kết hợp với anticyclosporine đã được phủ
trên các vi hạt thuận từ. Sau khi rửa, cyclosporine có đánh dấu acridinium (chất có
khả năng phát quang) được cho vào ở bước hai để tạo hỗn hợp phản ứng.
Kết quả của phản ứng hóa phát quang được tính bằng đơn vị ánh sáng tương
đương (RLU). Sự tương quan tỉ lệ nghịch giữa lượng cyclosporine trong mẫu và
RLUs sẽ được bộ phận quang học trong máy phát hiện.
II. CHUẨN BỊ
1. Người thực hiện
01 cán bộ đại học , 01 kỹ thuật viên chuyên ngành hóa sinh
2. Phương tiện, hóa chất
- Phương tiệ n: Máy xét nghiệm Architect.
- Hóa chất: Hóa chất tiền xử lý và tách chiết Cyclosporin. Hóa chất xét nghiệm
Cyclosporin, chất chuẩn Cyclosporin, chất kiểm tra chất lượng Cyclosporin.
3. Người bệnh
Người bệnh cần được giải thích về mục đích của việc lấy máu để làm xét nghiệm. Tùy
theo yêu cầu mà có thể lấy máu định lương Cyclosporin ở những thời điểm khác
nhau.
4. Phiếu xét nghiệm
Phiếu xét nghiệm cần ghi đầy đủ thông tin về tên, tu ổi, giới tính, khoa phòng, chẩn
đoán của người bệnh và ghi rõ chỉ định xét nghiệm
III. CÁC BƯỚC TIẾN HÀNH
1. Lấy bệnh phẩm
- Chỉ sử dụng mẫu máu toàn phần thu thập trong ống EDT cho xét nghiệm
Cyclosporine. Phải ghi rõ thời điểm lấy mẫu và lần cuối sử dụn g Cyclosporine lên
ống đựng mẫu. 154
- Các chất chống đông dạng lỏng có thể có làm loãng bệnh phẩm dẫn đến giảm nồng
độ Cyclosporine của người bệnh .
- Bệnh phẩm ổn đinh đến 7 ngày ở nhiệt độ 2 -8°C. Nếu xét nghiệm đ ược thực hiện
sau hơn 7 ngày cần bảo quản đông lạnh ( -10°C hoặc lạnh h ơn). Không bảo quản mẫu
đã tiền xử lý.
- Bệnh phẩm chỉ rã đông 1 lần và phải trộn kỹ trước khi tiền xử lý.
2. Tiến hành kỹ thuật
- Máy phân tích cần chuẩn bị sẵn sàng để thực hiện phân tích mẫu: Máy đã được
chuẩn với xét nghiệm Cyclosporine. Kết quả kiểm tra chất lượng với xét nghiệm
Cyclosporine đạt yêu cầu không nằm ngoài dải cho phép và không vi phạm luật kiểm
tra chất lượng.
- Xét nghiệm Cyclosporine yêu cầu phải thực hiện bước tiền xử lý bệnh phẩm bằng
tay theo quy trình sau:
1. Trộn mỗi mẫu (mẫu bệnh phẩm, mẫu chuẩn hay mẫu chứng) bằng cách lắc đảo
ngược nhẹ ống đựng mẫu từ 5 -10 lần. Mẫu máu toàn phần để lâu h ơn sẽ phải trộn lâu
hơn. Nên kiểm tra bằng mắt th ường để đảm bảo mẫu đ ược trộn đúng cách.
2. Hút chính xác 200µL của mỗi mẫu vào ống XSYSTEMS Centrifuge Tube ngay
sau khi trộn. Sử dụng mỗi ống tube khác nhau cho mỗi mẫu. Phải sử dụng đầu côn
mới cho mỗi lần hút 200µL. Không đ ược lau đầu côn. Không sử dụng lại đầu côn cho
các lần chạy lặp lại.
3. Thêm 100µL thuốc thử RCHITECT Cycl osporine Whole Blood Solubilization
vào mỗi ống ly tâm, chú ý để đầu côn chạm vào thành ống ly tâm.
4. Thêm 400µL thuốc thử RCHITECT Cyclosporine Whole Blood Precipitation
vào mỗi ống ly tâm, đầu côn chạm vào thành ống. Cyclosporine Whole Blood
Precipitation Reagent rất dễ bay h ơi cần đ óng chặt nắp khi không sử dụng để tránh
bay hơi.
5. Sau khi thêm ARCHITECT Cyclosporine Whole Blood Precipitation Reagent vào
tất cả các ống ly tâm, đậy nắp tất cả các ống ly tâm và trộ n bằng máy Vortex từ 5 -10
giây. Cài đặt chế đ ộ trộn lắc lớn nhất. Cần quan sát bằng mắt th ường để đảm bảo hỗn
hợp mẫu với thuốc thử hòa tan và kết tủa đồng nhất.
6. Ly tâm các ống tube trong